Meracik Medium MS

Meracik Medium MS
Penulis : Agung Surono

Medium dasar Murashige dan Skoog (MS) digunakan untuk hamper semua macam tumbuhan. Media ini mempunyai konsentrasi garam-garam mineral yang tinggi dan senyawa N dalam bentuk NO3- dan NH4+. Berikut formulasi medium MS :

Macro Element
	mg/l	mM
CaCl2	440,00	2,99
KH2PO4	170,00	1,25
KNO3	1900,00	18,79
MgSO4	370,00	1,50
NH4NO3	1650,00	20,61
Micro Element
	mg/l	µM
CoCl2.6H2O	0,025	0,11
CuSO4.5H2O	0,025	0,10
FeNaEDTA	36,70	100,00
H3BO3	6,20	100,27
KI	0,83	5,00
MnSO4.H2O	16,90	100,00
Na2MoO4.2H2O	0,25	1,03
ZnSO4.7H2O	8,60	29,91
Vitamins
	mg/l	µM
Glycine	2,00	26,64
Myo-inositol	100,00	554,94
Nicotinic Acid	0,50	4,06
Pyridoxine HCl	0,50	2,43
Thiamine HCL	0,10	0,30

Bahan-bahan kimia yang merupakan penyusun senyawa makro yang terdiri dari CaCl2, KH2PO4, KNO3, MgSO4, NH4NO3

 Bahan-bahan kimia yang merupakan penyusun senyawa mikro yang terdiri dari CoCl2.6H2O, CuSO4.5H2O, FeSO4, Na2EDTA (bisa diganti dengan FeNaEDTA), H3BO3, KI, MnSO4.H2O, Na2MoO4.2H2O, ZnSO4.7H2O

Bahan-bahan kimia yang merupakan penyusun vitamin yang terdiri dari Glycine, Myo-inosito, Nicotinic Acid, Pyridoxine HCl, Thiamine HCL

Tabel pembuatan larutan stok Makro, Mikro, Besi, Vitamin, Hormon cara ke satu

Nama Stok	Senyawa Dalam Larutan Stok	Konsentrasi Dalam Media MS (mg/l)	Konsentrasi Dalam larutan Stok (mg/l)	Volume Larutan Stok yang dibutuhkan per Liter Media (ml)
Makro (10x)	NH4NO3	1650	16500	10
	KNO3	1900	19000
	MgSO4	370	3700
	KH2PO4	170	1700
Ca (100x)	CaCl2.2H2O	440	44000	10
Mikro A (100x)	H3BO3	6,2	620	10
	MnSO4.H2O	16,9	1690
	ZnSO4.7H2O	8,6	860
Mikro B (1000x)	KI	0,83	830	1
	Na2MoO4.2H2O	0,25	250
	CuSO4.5H2O	0,025	25
	CoCl2.6H2O	0,025	25
Fe (100X)	FeSO4.7H2O	27,8	2780	10
	Na2EDTA	37,3	3730
Vitamin (1000x)	Thiamine HCL	0,1	100	1
	Pyridoxine HCL	0,5	500
	Nicotinic Acid	0,5	500
	Glycine	2	2000
Myoinositol (50X)	Myoinositol	100	5000	20
Gula	Sukrosa	30000	tidak dibat stok
Nama ZPT	BA	Sesuai kebutuhan	100	sesuai kebutuhan
	NAA		100
	GA		100
Pemadat	Agar-agar	7000- 8000	tidak dibat stok

Tabel pembuatan larutan stok Makro, Mikro, Besi, Vitamin, Hormon cara ke dua

Nama Stok	Senyawa Dalam Larutan Stok	Konsentrasi Dalam Media MS (mg/l)	Konsentrasi Dalam larutan Stok (mg/l)	Volume Larutan Stok yang dibutuhkan per Liter Media (ml)
A (10x)	NH4NO3	1650	16500	100
B (10x)	KNO3	1900	19000	100
C (100x)	CaCl2.2H2O	440	44000	10
D (10x)	KH2PO4	170	1700	100
E (1000x)	H3BO3	6,2	620	10
	Na2MoO4.2H2O	0,25	250
	CoCl2.6H2O	0,025	25
	KI	0,83	830
F (200x)	MnSO4.H2O	16,9	3380	5
	ZnSO4.7H2O	8,6	1720
	MgSO4.7H2O	370	74000
	CuSO4.5H2O	0,025	25
G (100X)	FeSO4.7H2O	27,8	2780	10
	Na2EDTA	37,3	3730
Vitamin (1000x)	Thiamine HCL	0,1	100	1
	Pyridoxine HCL	0,5	500
	Nicotinic Acid	0,5	500
	Glycine	2	2000
Myoinositol (50X)	Myoinositol	100	5000	20
Gula	Sukrosa	30000	tidak dibat stok
Nama ZPT	BA	Sesuai kebutuhan	100	sesuai kebutuhan
	NAA		100
	GA		100
Pemadat	Agar-agar	7000- 8000	tidak dibat stok

PEMBUATAN STOK HARA MAKRO

Larutan stok untuk hara makro dapat dijadikan dua, dengan memisahkan CaCl2.2H2O dalam stok sendiri. Stok makro MS dengan kepekatan 10 kali lebih pekat berisi

16,5 gram NH4NO3,

19 gram KNO3,

3,7 gram MgSO4.7H2O dan

1,7 gram KH2PO4

per liter air. Membuat larutan stok hara makro dilakukan dengan cara sebagai berikut.

[1]  Siapkan  gelas piala ukuran 1 liter yang diisi dengan 500 ml aquades.

[2]  Timbang setiap komponen makro, lalu masukkan dan larutkan satu demi satu. Untuk menghidari terjadinya endapan hendaknya jangan dimasukkan beberapa komponen media sekaligus.

[3]  Setelah semua komponen media larut, tambahkan aquades sampai volume akhir meanjadi 1000 ml dengan menggunakan labu ukur atau gelas ukur. Penggunaan gelas piala untuk pengukuran secara akurat sangat tidak dianjurkan.

[4]  Pada saat membuat media, larutan stok hara makro yang diambil adalah sebanyak 100 ml per liter media.

PEMBUATAN STOK Ca

Stok Ca dengan konsentrasi 100 kali lebih pekat berisi 44 gram CaCl2.2H2O per liter air atau 22 gram per 500 ml air. Stok Ca perlu dipisahkan dengan stok hara makro lainnya oleh karena akan terjadi pengendapan jika dijadikan satu. Cara membuat larutan stok Ca lebih mudah karena hanya berisi satu zat saja. Caranya:

Siapkan gelas piala yang berisi 400 ml aquades, lalu masukkan 22 gram CaCl2. 2H2O dan aduk sampai larut. Setelah itu, masukkan larutan tadi ke dalam labu takar berukuran 500 ml, lalu tambahkan aquades sehingga volumenya 500 ml. Setelah laruran ditambah dengan aquades sehingga volume akhir, larutan stok perlu diaduk lagi saat membuat media kultur, larutan stok Ca yang diambil sebanyak 10 ml per liter media.

PEMBUATAN STOK HARA MIKRO

Pembuatan larutan stok mikro A, mikro B, vitamin dilakukan sama seperti pembuatan stok makro.

Stok Mikro A menimbang bahan-bahan kimia yang terdiri dari:

0,62 gram H3BO3

1,69 gram Mn.SO4.H2O

0,86 gram ZnSO4.7H2O

Komponen media ditimbang dan dilarutkan ke dalam aquades satu demi satu sampai larut dan ditambah aquades sampai volume 1000 ml dalam labu ukur, lalu diaduk kembali. Larutan stok mikro A yang diambil sebanyak 10 ml per liter media.

Untuk pembuatan larutan Stok Mikro B menimbang bahan kimia yang terdiri dari :

0,83 gram KI

0,25 gram Na2MoO4.2H2O

0,025 gram CuSO4.5H2O

0,025 gram CoCl2.6H2O

Komponen media ditimbang dan dilarutkan ke dalam aquades satu demi satu sampai larut dan ditambah aquades sampai volume 1000 ml dalam labu ukur, lalu diaduk kembali.

Sementara itu larutan stok mikro B diambil sebanyak 1 ml per liter media.

PEMBUATAN STOK BESI (Fe)

Pembuatan larutan stok besi (Fe) berbeda dengan pembauatan larutan stok lainnya. Untuk mencegah terjadinya pengenadapan, setiap komponen (FeSO4 dan Na2EDTA) dilarutkan secara tersendiri dalam gelas piala yang terpisah. Contohnya, volume larutan stok akhir yang dibuat sebanyak 1000 ml, maka 2,78 gram FeSO4.7H2O dilarutkan dalam 400 ml aquades sambil dipanasi pada hot plate magnetic stirer dan 3,73 gram Na2EDTA juga dilarutkan  dalam 400 ml aquades dalam gelas piala lain. Pelarutan Na2EDTA sebaiknya dilakukan dengan mengaduk sambil dipanasakan. Setelah semua larutan homogen, sedikit demi sedikit kedua larutan dicampur sambil diaduk. Setelah itu, dengan menggunakan labu takar, volume akhir larutan dibuat 1000 ml dengan menambahkan aquadest. Larutan stok Fe yang benar akan berwarna kuning muda dan jernih. Untuk mencegah terjadinya oksidasi, larutan stok Fe harus disimpan dalam botol berwarna gelap atau botoll yang dibungkus dengan aluminium foil. Pada saat membuat media kultur, larutan stok besi yang diambil sebanyak 10 ml per liter media.

 Proses pembuatan stok besi dengan melarutkan bahan FeSO4 dan Na2EDTA secara terpisah dan setelah itu dicampur menjadi satu untuk membentuk FeNaEDTA

PEMBUATAN STOK VITAMIN

Untuk pembuatan stok vitamin ditimbang :

0,1 gram Thiamine HCL

0,5 gram Pyridoxine HCL

0,5 gram Nicotinic acid

2 gram Glycine

Komponen media ditimbang dan dilarutkan ke dalam aquades satu demi satu sampai larut dan ditambah aquades sampai volume 1000 ml dalam labu ukur, lalu diaduk kembali. Larutan stok vitamin yang diambil sebanyak 1 ml per liter media.

Sedangkan untuk pembuatan stok myoinositol ditimbang 5 gram myoinositol lalu dilarutkan ke dalam aquades satu demi satu sampai larut dan ditambah aquades sampai volume 1000 ml dalam labu ukur, lalu diaduk kembali. Larutan stok mio-inositol yang diambil sebanyak 20 ml per liter media.

Jenis Zat Pengatur Tumbuh	Jumlah Zat Pengatur Tumbuh	Jenis Pelarut
Benzil adenin (Benzil Amino Purin)	100 mg	HCL 1 N
Kinetin	100 mg	HCL 1 N
2iP	100 mg	HCL 1 N
IAA	100 mg	NaOH atau KOH 1 N
IBA	100 mg	NaOH atau KOH 1 N
2,4 D	100 mg	Alkohol 95 %
GA3	100 mg	NaOH atau KOH 1 N

  

Macam-macam hormon tumbuh yang akan dibuat stok

Proses pembatan stok hormon tumbuh

Macam-macam larutan stok hormon tumbuh dari golongan auksin, sitokinin dan giberellin

PEMBUATAN STOK AUKSIN 1000 ppm

[1] Ditimbang Auksin (IAA, 2,4-D, NAA, IBA) 100 mg

[2] Masukkan dalam gelas piala yang berisi 70 ml akuades

[3] Ditetesi KOH 1 N sampai larut, tambahkan akuades hingga 100 ml

[4] Beri label AUKSIN 1000 ppm (1ml = 1 ppm)

PEMBUATAN STOK SITOKININ 1000 ppm

[1] Ditimbang Sitokinin (Kinetin, BA, BAP) 100 mg, dimasukkan dalam gelas piala + akuades 70 ml

[2] Ditetesi HCl 1N sampai larut

[3] Tambahkan akuades hingga 100 ml

[4] Beri label KINETIN 1000 ppm (1 ml = 1 ppm)

Semua larutan stok sebaiknya disimpan di dalam lemari es.

 

Misalakan saja :

Akan membuat larutan stok makro nutrien dengan volume 1000 ml (20 kali konsentrasi) maka untuk membuat larutan persediaan / liter media yaitu :

Penimbangan 20 kali dilarutkan sampai 1000 ml = 1000/20 = 20 ml/liter jadi untuk membuat 1 liter media MS volume yang diambil adalah 50 ml.

 Bahan-bahan kimia penyusun media MS dan larutan stok makro, Ca, mikro, besi, vitamin dan hormon tumbuh

Gula, agar, dan hormon tumbuh disiapkan terlebih dahulu

Cara pembuatan medium MS :

[1] Makronutrien

NH4NO3 : 1.650 mg

KNO3 : 1.900 mg

CaCl2.2H2O : 440 mg

MgSO4.7H2O : 370 mg

KH2PO4 : 170 mg

Larutkan dalam 500 ml aquades.

[2] Mikronutrien : tambahkan stok mikro 5 ml.

[3] Iron (Fe) : tambahkan stok besi 5 ml.

[4] Vitamin : tambahkan stok vitamin 1 ml

[5] Hormon/ZPT : sesuai dengan perlakuan.

[6] Myo-inositol : 100 mg

[7] Sukrosa : 30 gram.

 Menambahkan gula ke dalam racikan makro, Ca, mikro, besi, dan vitamin

o Tambahkan aquades sampai mendekati 1 liter (900 ml).

 Penambahan hormon tumbuh sesuai kebutuhan 

o Ukur pH media (5,6 – 5,8 kalau mau aman pH diset di 5,8 - 6,0 sehingga saat pemanasan dengan autoklaf turun 0,2 maka pH akhir di 5,6 – 5,8)

o Tambahkan volume media menjadi 1 liter.

o Panaskan media.

 Panaskan hingga agar larut secara homogen

o Masukkan 7 gram agar dan aduk sampai dengan larut semua.

o Tuangkan dalam botol kultur steril.

Dituang di botol dan ditutup siap diautoclave

o Tutup dengan aluminium foil.

o Sterilisasi dengan autoclave.

o Media siap digunakan.

Dokumentasi : 

Agung Surono

Laboratorium di Wonosobo milik peserta kursus budidaa kentang dengan teknik kultur jaringan